Лабораторні дослідження системи гемостазу (ІІ)

Інструкція до практичного заняття №23

Тема: «Лабораторні дослідження системи гемостазу (ІІ). Визначення концентрації фібриногену в плазмі крові».

Спеціальність 5.12010201 «Лабораторна діагностика»

Обладнання: лабораторний посуд, центрифуга, торсійні ваги, водяна баня, секундомір, фільтрувальний папір, бланки аналізів.
Реактиви та біологічний матеріал:

3,8% розчин цитрату натрію, 5% розчин хлориду кальцію, суспензія тромбопластину, розчин тромбіну (активність 10 секунд).

Основна:

ü  Біологічна хімія з біохімічними методами дослідження / О.Я. Скляров, Н.В. Фартушок, Л.Д. Сойка, І.С. Смачило. — К.: Медицина, 2009. — 352 с.

ü  Біохімічні показники в нормі і при патології / За ред. О.Я. Склярова. — К.: Медицина, 2007.— 320 с.

ü  Гонський Я.І., Максимчук Т.П. Біохімія людини. — Тернопіль: Укрмедкнига, 2001. — 736 с.

Губський Ю.І. Біологічна хімія. — К.: — Вінниця: Нова книга, 2007. — 656 с.

ü  Іваницька Г.І., Люленко Л.В., Іваницька М.В. Практикум з клінічної біохімії: навч. посіб. — К.: Медицина, 2010. — 184 с.

ü  Клінічна біохімія: підручник / Д.П. Бойків, Т.І. Бондарчук, О.В. Іванків та ін.; За ред О.Я. Склярова. — К.: Медицина, 2006. — 432 с.

ü  Конспект лекцій

Додаткова:

ü  Горячковский А.М. Клиническая биохимия в лабораторной диагностике. — Одесса: Экология, 2005. — 607 с.

ü  Кучеренко М.Є., Бабенюк Ю.Д., Войціцький В.М. Сучасні методи біохімічних досліджень. — К.: Фітосоціоцентр, 2001. — 424 с.

ü  Маршалл В. Дж. Клиническая биохимия. — М.: БИНОМ, Невский Диалект, 2000. — 368 с.

ü  Практикум з біологічної хімії / За ред О.Я. Склярова. — К.: Здоров’я, 2002. — 298 с.

Мета: навчитися визначати концентрацію фібриногену в плазмі крові.

Конкретні цілі:

Студент повинен:

Знати	Вміти
1.Визначення терміна «гемостаз». 2.Фактори згортання крові. 3.Механізм згортання крові. 4.Механізм протизгортальної системи крові. 5.Види та причини гемостазепатій.	1.Готувати реактиви. 2.Виявляти фібриноген у плазмі крові та розраховувати його концентрацію за формулою; 3.Записувати результати досліджень у бланки аналізів. 4. Забезпечувати санітарно-протиепідемічний режим у лабораторії біологічної хімії з біохімічними методами дослідження.

 Перелік практичних навичок:

1.Організація робочого місця.

2.Підготовка біологічного матеріалу для дослідження.

3. Визначення концентрації фібриногену в плазмі крові.

4.Знезараження відпрацьованого матеріалу.

Основні правила техніки безпеки і охорони праці:

1.Правила техніки безпеки при роботі з електроприладами (Додаток №1)

2.Правила роботи з інфікованим матеріалом (Додаток №2)

3.Дезінфекційні заходи (Додаток №3)

Хід роботи:

І.Теоретична конкретизація знань

1.Які функціональні та біохімічні властивості системи гемостазу?

2.Перелічіть фактори згортання крові.

3.Назвіть фактори згортання, які містяться у формених елементах крові й тканинах.

4.Схарактеризуйте судинно-тромбоцитарний гемостаз.

5.Що таке гемофілії? Назвіть їх види, причини виникнення.

6.У чому виявляється синдром дисемінованого внутрішньосудинного згортання (ДВЗ - синдром)?

ІІ. Практична робота студента під керівництвом викладача

Визначення концентрації фібриногену у плазмі крові за методом Рутберга.

Принцип методу: Згортання фібриногену плазми хлоридом кальцію, швидке підсушування та зважування згустку фібрину.

Проведення аналізу:

До 1 мл плазми додають 0,1 мл 5% розчину хлориду кальцію. Утворившийся фібрин намативають на скляну паличку, яку виймають з пробірки тільки після  того, як в ній повністю не закінчиться поява навіть маленьких згустків або ниток фібрину. Фібрин знімають з палички за допомогою беззольного фільтру.  Стисненням беззольного фільтру, всередині якого знаходиться згусток фібрину, удаляють з останнього сироватку. Згусток послідовно переміщують по фільтру і підвергають стисненню до тих пір, поки на папері в проходящем світлі не будуть з’являться сліди вологи. Висушений таким чином фібрин зважують на торсійних терезах з точністю до 1 мг.

Час згортання плазми 5% хлоридом кальцію при кімнатній температурі складає в середньому 11 секунд. Коли потрібно прискорити визначення фібриногену або коли в дослідженій плазмі час рекальцифікації різко сповільнюється потрібно замість 5% хлориду кальцію використовувати розчин тромбіну або суміш тромбопластину з 3% розчином (1:1) хлориду кальцію і поставить пробірку з плазмой у водяну баню при    37 ⁰С.

Для перерахунку концентрації фібриногену в грамах на літр по сухій речовині, з врахуванням розведення плазми розчином цитрату натрію, одержану вагу фібрину в міліграмах помножують на коефіцієнт 0,222.

Норма концентрації фібриногену у плазмі крові – 2 – 4 г/л.

Клініко-діагностичне значення. Зниження концентрації фібриногену відмічається при вродженій α-гіперфібриногенемії, при вторинних порушеннях синтезу фібриногену (хвороби печінки), при ДВЗ-синдромі.

Гіперфібриногенемія присутня при багатьох гострих запальних процесах (пневманії, ревматизм), інфаркті міокарда. Вона далко не завжди говорить о гіперкоагуляції або схильності до тромбозів. Фізіологічне збільшення фібриногену відмічається в період менструації та вагітності.

ІV. Контрольні питання до закріплення знань з теми «Лабораторні дослідження системи гемостазу».

1. Що називають гемостазом? Які його функціональні компоненти7

2. Які види гемостазу?

3. Які фактори судинно-тромбоцитарного гемостазу?

4. Яку характеристику мають плазмові фактори макроциркуляторного гемостазу?

5. Скільки фаз має процес згортання крові? Охарактеризуйте кожну фазу.

6. Яку роль виконує антикоагулянт на система в процесі гемостазу?

 V. Висновок до практичного заняття.

 VІ. Домашнє завдання

1. Конспект лекції «Лабораторні дослідження системи гемостазу».

2. Біологічна хімія з біохімічними методами дослідження / О.Я. Скляров, Н.В. Фартушок, Л.Д. Сойка, І.С. Смачило. — К.: Медицина, 2009.(ст.322 - 343).

3. Практикум з клінічної біохімії: навч. Посібник /Г.І. Іваницька, Л.В.Люленко, М.В. Іваницька; за редакцією Г.І. Іваницької. – К.: ВСВ «Медицина», 2010. (ст. 157-158).