Вітаємо Вас на нашому блозі! ТУТ Ви можете ознайомитися з матеріалами теоретичних і практичних занять. З повагою, викладачі біохімії Бабій О.В. та Дубінська О.А.

Лабораторні дослідження системи гемостазу (І)

Інструкція до практичного заняття №22
Тема: «Лабораторні дослідження системи гемостазу. Визначення протромбінового часу, протромбінового індексу, часу рекальцифікації плазми».

 
Спеціальність 5.12010201 «Лабораторна діагностика»

Обладнання: лабораторний посуд, центрифуга, водяна баня, секундомір, фільтрувальний папір, бланки аналізів.
Реактиви та біологічний матеріал: 0,277% розчин хлориду кальцію, 0,85% розчин натрій хлориду, 1% суспензія тромбопластину, 3,8% розчин цитрату натрію.
Основна:
  • Біологічна хімія з біохімічними методами дослідження / О.Я. Скляров, Н.В. Фартушок, Л.Д. Сойка, І.С. Смачило.— К.: Медицина, 2009. — 352 с.
  • Біохімічні показники в нормі і при патології / За ред. О.Я. Склярова. — К.: Медицина, 2007.— 320 с.
  • Гонський Я.І., Максимчук Т.П. Біохімія людини. — Тернопіль: Укрмедкнига, 2001. — 736 с.
  • Губський Ю.І. Біологічна хімія. — К.: — Вінниця: Нова книга, 2007. — 656 с.
  • Іваницька Г.І., Люленко Л.В., Іваницька М.В. Практикум з клінічної біохімії: навч. посіб. — К.: Медицина, 2010. — 184 с.
  • Клінічна біохімія: підручник / Д.П. Бойків, Т.І. Бондарчук, О.В. Іванків та ін.; За ред О.Я. Склярова. — К.: Медицина, 2006. — 432 с.
  • Конспект лекцій
Додаткова:
Горячковский А.М. Клиническая биохимия в лабораторной диагностике. — Одесса: Экология, 2005. — 607 с.
Кучеренко М.Є., Бабенюк Ю.Д., Войціцький В.М. Сучасні методи біохімічних досліджень. — К.: Фітосоціоцентр, 2001. — 424 с.
Маршалл В. Дж. Клиническая биохимия. — М.: БИНОМ, Невский Диалект, 2000. — 368 с.
Практикум з біологічної хімії / За ред О.Я. Склярова. — К.: Здоров’я, 2002. — 298 с.
Мета: навчитися визначати протромбіновий час, протромбінів індекс, час рекальцифікації плазми крові.
Конкретні цілі:
 Студент повинен:


Знати
Вміти

1.Сучасні уявлення про систему гемостазу. 2.Коагуляційний гемостаз.

3.Плазмові та тромбоцитарні фактори згортання крові, регуляція. 4.Антикоагулянтна система. 5.Антикоагулянти фізіологічні та патологічні, прямої і непрямої дії, синтез. 6.Фібринолітична система. Методи дослідження системи гемостазу.

7.КДЗ визначення протромбінового часу, протромбінового індексу, часу рекальцифікації плазми крові.
1.Готувати реактиви.

2.Проводити первинний відбір результатів досліджень за критерієм: норма/патологія.

3. Визначати протромбіновий час, протромбіновий індекс, час рекальцифікації плазми крові.

4.Записувати результати досліджень у бланки аналізів.

5. Забезпечувати санітарно-протиепідемічний режим у лабораторії біологічної хімії з біохімічними методами дослідження.

Перелік практичних навичок:
1.Організація робочого місця.
2.Підготовка біологічного матеріалу для дослідження.
3. Визначення протромбінового часу, протромбінового індексу, часу рекальцифікації плазми крові.
4.Знезараження відпрацьованого матеріалу.

Основні правила техніки безпеки і охорони праці:

1.Правила техніки безпеки при роботі з електроприладами (Додаток №1)
2.Правила роботи з інфікованим матеріалом (Додаток №2)
3.Дезінфекційні заходи (Додаток №3)

Хід роботи:

І. Теоретична конкретизація знань

1.Основні компоненти крові та їх клінічне значення.
2.Що таке плазма та сироватка крові?
3.В яких межах може коливатися рН крові зорової людини?
4. Функції системи гемостазу.
5.Назвіть основні фізіологічні властивості тромбоцитів.
6.Які фактори згортання крові Ви знаєте?
7.Які етапи коагуляційного гемостазу Ви знаєте?

 ІІ. Практична робота студента під керівництвом викладача

Визначення протромбінового часу, протромбінового індексу плазми крові.

Принцип методу: метод заснований на тому, що при наявності надлишку тромбопластину і оптимального вмісту кальцію час утворення згустку в плазмі залежить від активності факторів протромбінового комплексу ІІ, VII, IX, X.
Хід визначення:
В пробірку наливають 0,2 мл розчину кальцій хлориду та 0,1 мл суспензії тромбопластину. Суміш інкубують 30 с на водяній бані при 37 0С. В цю же пробірку додають 0,1 мл досліджуваної плазми, розведеної 1:1 фіз. розчином. При введенні плазми включають секундомір. Через 12-15 секунд, нахиляємо пробірку на 450,  спостерігають за появою нитки або згустку фібрину та в момент його появи виключають секундомір, а пробірку виймають з водяної бані. Таким чином визначення проводять ще 2 рази. При цьому різниця між паралельними визначеннями повинна становити не більше ½-1 с. Визначення активності протромбіну потрібно проводити не пізніше, чим через 2 години після того, як взяли кров. Закінчив визначення, розраховують протромбіновий індекс, використовують при цьому його середнє арифметичне з паралельних визначень по формулі:
 
Протромбіновий індекс (%) = (час утворення згустку плазми доноро / час утворення згустку плазми обстеженого)* 100 %
 
Протромбіновий час здорової людини (донора) вказаний на етикетці флакону з тромбопластином. Додатково протромбіновий час, вказаний на етикетці, перевіряють на здорових людях (1-2 чоловіка). Час (по секундоміру), яки пройшов з моменту додавання плазми до появи згустку, є протромбіновим часом обстеженого.

Норма протромбінової активності плазми – 90-105%.

Визначення часу рекальцифікації плазми крові.

Принцип методу: Метод засновано на визначенні часу згортання плазми під час додавання до її оптимальної кількості розчину кальцію хлориду.

Хід роботи:
Для дослідження використовують плазму з неосадженими кров’яними пластинками. Для отримання такої плазми змішують кров із консервантом у співвідношенні 9:1 і центрифугують протягом 5 хв за швидкості 1000 об/хв. У пробірку, вставлену в мікротермостат, за температури 37 0С додають 0,2 мл 0,277% розчину кальцію хлориду і 0,1 мл ізотонічного розчину натрію хлориду. Через 60 с додають 0,1 мл плазми, вмикають секундомір і визначають час згортання плазми.

Норма часу рекальцифікації плазми крові – 60-120 с.
 
Клініко-діагностичне значення. Скорочення активності часу рекальцифікації плазми свідчить про прискорення, а подовження – про уповільнення процесу згортання крові.   

ІV. Контрольні питання до закріплення знань з теми «Лабораторні дослідження системи гемостазу».
1.Перелічіть фактори згортання крові.
2.В чому полягає принцип методу визначення протромбінового часу та протромбінового індексу в плазмі крові?
3.КДЗ визначення протромбінового часу та протромбінового індексу в плазмі крові?
4. В чому полягає принцип методу визначення  рекальцифікації плазми крові?
5. КДЗ визначення рекальцифікації плазми крові?

Рішення ситуаційних задач:
1.У пацієнта, що страждає кровотечею, виявлена неможливість утворення стабільного фібринового згустку. З недостатністю якого фактора згортання крові це пов'язано?
2.Відомо, що тромб протягом декількох днів після утворення  розчинюється.  Якому ферментові належить головна роль в цьому процесі?

V. Висновок до практичного заняття.

VІ. Домашнє завдання:

  • Конспект лекції «Лабораторні дослідження системи гемостазу».
  • Біологічна хімія з біохімічними методами дослідження / О.Я. Скляров, Н.В. Фартушок, Л.Д. Сойка, І.С. Смачило. — К.: Медицина, 2009.(ст.322-344).
  • Практикум з клінічної біохімії: навч. Посібник /Г.І. Іваницька, Л.В.Люленко, М.В. Іваницька; за редакцією Г.І. Іваницької. – К.: ВСВ «Медицина», 2010. (ст. 153-154)
 

Підписатися на: Дописи (Atom)