Лабораторні дослідження системи гемостазу (ІІІ)

Інструкція до практичного заняття №24

Тема: «Лабораторні дослідження системи гемостазу. Визначення толерантності плазми крові до гепарину».

Спеціальність 5.12010201 «Лабораторна діагностика»

Обладнання: лабораторний посуд, центрифуга, водяна баня, секундомір, фільтрувальний папір, бланки аналізів.

Реактиви та біологічний матеріал: гепарин-кальцієва суміш (0,05 мл розчину гепарину з активністю 5000 МО/мл вносять у колбу на 250 мл і доливають до позначки 0,025 М розчином кальцій хлориду. Суміш зберігають в холодильнику протягом 14 діб), 3,8% розчин цитрату натрію.

Основна:

·        Біологічна хімія з біохімічними методами дослідження / О.Я. Скляров, Н.В. Фартушок, Л.Д. Сойка, І.С. Смачило. — К.: Медицина, 2009. — 352 с.

·        Біохімічні показники в нормі і при патології / За ред. О.Я. Склярова. — К.: Медицина, 2007.— 320 с.

·        Гонський Я.І., Максимчук Т.П. Біохімія людини. — Тернопіль: Укрмедкнига, 2001. — 736 с.

·        Губський Ю.І. Біологічна хімія. — К.: — Вінниця: Нова книга, 2007. — 656 с.

·        Іваницька Г.І., Люленко Л.В., Іваницька М.В. Практикум з клінічної біохімії: навч. посіб. — К.: Медицина, 2010. — 184 с.

·        Клінічна біохімія: підручник / Д.П. Бойків, Т.І. Бондарчук, О.В. Іванків та ін.; За ред О.Я. Склярова. — К.: Медицина, 2006. — 432 с.

·        Конспект лекцій

Додаткова:

·        Горячковский А.М. Клиническая биохимия в лабораторной диагностике. — Одесса: Экология, 2005. — 607 с.

·        Кучеренко М.Є., Бабенюк Ю.Д., Войціцький В.М. Сучасні методи біохімічних досліджень. — К.: Фітосоціоцентр, 2001. — 424 с.

·        Маршалл В. Дж. Клиническая биохимия. — М.: БИНОМ, Невский Диалект, 2000. — 368 с.

·        Практикум з біологічної хімії / За ред О.Я. Склярова. — К.: Здоров’я, 2002. — 298 с.

Мета: навчитися визначати толерантність плазми крові до гепарину.

Конкретні цілі:

Студент повинен:

Знати	Вміти
1. Сучасні уявлення про систему гемостазу. 2. Коагуляційний гемостаз. 3. Плазмові та тромбоцитарні фактори згортання крові, регуляція.  4. Антикоагулянтна система.  5. Антикоагулянти фізіологічні та патологічні, прямої і непрямої дії, синтез.  6. Фібринолітична система. Методи дослідження системи гемостазу. 7. КДЗ визначення толерантності плазми крові до гепарину.	1. Готувати реактиви. 2. Проводити первинний відбір результатів досліджень за критерієм: норма/патологія. 3. Визначати толерантність плазми крові до гепарину. 4. Записувати результати досліджень у бланки аналізів. 5. Забезпечувати санітарно-протиепідемічний режим у лабораторії біологічної хімії з біохімічними методами дослідження.

Перелік практичних навичок:

1.Організація робочого місця.

2.Підготовка біологічного матеріалу для дослідження.

3. Визначення толерантності плазми крові до гепарину.

4.Знезараження відпрацьованого матеріалу.

Основні правила техніки безпеки і охорони праці:

1.Правила техніки безпеки при роботі з електроприладами (Додаток №1)

2.Правила роботи з інфікованим матеріалом (Додаток №2)

3.Дезінфекційні заходи (Додаток №3)

Хід роботи:

І.Теоретична конкретизація знань

ü Коагуляційний гемостаз. Плазмові та тромбоцитарні фактори згортання крові, регуляція.

ü Фібринолітична система.

ü Тести для дослідження коагуляційного гемостазу у клінічній практиці.

ü Методи дослідження антикоагулянтної та фібринолітичної систем.

ü Гемофілії.

ü Тромбофілії.

ІІ. Практична робота студента під керівництвом викладача

Визначення толерантності плазми крові до гепарину

Принцип методу: у разі внесення у плазму певної концентрації гепарину час його рекальцифікації змінюється залежно від коагуляційної ак­тивності крові.

Хід визначення:

У хімічну пробірку вносять 0,2 мл плазми і занурюють у во­дяну баню за температури 37 °С на 1 хв. Після цього добавляють 0,2 мг гепарин-кальцієвої суміші, попередньо прогрітої за темпе­ратури 37 °С, і ретельно змішують. Через кожні 2—3 хв, а напри­кінці реакції частіше, пробірки повільно нахиляють і спостеріга­ють появу ниток фібрину.

Норма толерантності плазми до гепарину — 10—16 хв.

Клініко-діагностичне значення:

Зниження толерантності плазми до гепарину (до 20 хв) спостерігають при тромбоцитопе­нії, у разі підвищення антикоагуляційної активності крові і після введення гепарину за умови достатнього рівня антитромбіну III.

Підвищення толерантності плазми до гепарину (до 9 хв) ви­являють при ДВЗ-синдромі, у разі циркуляції в крові тканинного тромбопластину (оперативне втручання), що зв'язує гепарин, де­фіциту в плазмі крові антитромбіну III, без якого гепарин втрачає свої антикоагуляційні властивості.

ІV. Контрольні питання до закріплення знань з теми «Лабораторні дослідження системи гемостазу».

1.Які функціональні та біохімічні властивості гемостазу?

2.Перелічіть фактори згортання крові.

3.Назвіть фактори згортання крові, які містяться у формених елементах крові і тканинах?

4.У чому проявляється ДВЗ-синдром.

5.Принцип методу визначення толерантності плазми крові до гепарину.

6.Як приготувати гепарин-кальцієву суміш?

7.КДЗ визначення толерантності плазми крові до гепарину.

Рішення ситуаційних задач:

1.У хлопчика, хворого на гемофілію А (хворобу Віллебранда), при найменших порізах і травмах виникають кровотечі. У разі відсутності якого фактора згортання крові спостерігається така форма гемофілії?

2.У хворого, що страждає на геморагічний діатез, виявлено гемофілію В (хворобу Крістмаса). У разі відсутності якого фактора згортання крові спостерігається ця форма гемофілії?

V. Висновок до практичного заняття.

VІ. Домашнє завдання:

ü Конспект лекції «Лабораторні дослідження системи гемостазу». Підготовка до модулю №4.

ü Біологічна хімія з біохімічними методами дослідження / О.Я. Скляров, Н.В. Фартушок, Л.Д. Сойка, І.С. Смачило. — К.: Медицина, 2009.(ст.322-344).

ü Практикум з клінічної біохімії: навч. Посібник /Г.І. Іваницька, Л.В.Люленко, М.В. Іваницька; за редакцією Г.І. Іваницької. – К.: ВСВ «Медицина», 2010.      (ст. 158-160).